18
تحديد الانواع الوراثية ] P [ و G لفيروس روتا الانسان في اطفال محافظة بابل
باستخدام تقهية تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدي conventional – PCR
يونس عبد الرضا حو ا رء جواد كاظم
كمية طب الاسنان جامعة بابل - كمية العموم لمبنات جامعة بابل -
younis_1953@yahoo.com mobalqaswar@yahoo.com
الخلاصة
استعممت في ىذه الد ا رسة تقنية الشريط السريع و تقنية تفاعل البممرة المتسمسل المعكوس التقميدي (conventional reverse transcriptase – PCR) بغية معرفة الأنواع الو ا رثية لفيروس الروتا في عينات ب ا رز أخذت من أطفال مخمجين من
مناطق متفرقة في محافظة بابل , أظيروا بعض الأع ا رض المُميزة لالتياب المعدة والأمعاء الحاد مثل الإسيال والحمى والتقيؤ لممدة من
تشرين الأول و تشرين الثاني و كانون الأول من العام 2011 وكانون الثاني و شباط و آذار من العام 2012 , ت ا روحت أعمارىم من
0 - 60 شي ا ر, إذ اختبر 470 انموذجا من عينات ب ا رز الاطفال باستعمال الشريط السريع , وبعدىا اخذ 80 نموذجا اعطى نتيجة
موجبة باستعمال الشريط السريع لمعرفة الانواع الو ا رثية السائدة وباستعمال بوادئ خاصة Specific primers للأنواع الو ا رثية P] [ و G
وبعد استخلاص الحامض النووي الريبي RNA لفيروس الروتا من النماذج وتحويمو إلى الدنا المتمم complementary DNA وجد
أن أكثر الأنواع الو ا رثية المشخصة من النوع G انتشا ا ر في المحافظة ىي G1 و G4 و G2 و G8 , بينما لوحظ أن الأنواع P[8] و
P[4] و P[6] ىي الأكثر انتشا ا ر بالنسبة لمنوع الو ا رثي P] . ]
الكممات المفتاحية : الاسيال الفيروسي , فيروس الروتا , فحص الشريط السريع وفحص تفاعل البممرة المتسمسل التقميدي . -
Abstract
Rapid test device technique and conventional - PCR technique was used in this study for detection of rotavirus genotypes in stool samples which were collected from children who were living in different area of Babylon governorate with symptoms of acute gastroenteritis such as diarrhoea , fever and vomition for the period from October 2011 to March of 2012 , Their age range from 0 – 60 months , 470 diarrhoea stools sample from children was tested by using rapid stripe , then 80 sample which gave positive result by rapid test device were used to know G and [P] type by using specific G and [P] primer .After extraction of viral RNA and its convertion to cDNA . The results detected that the prevalent G – genotypes was G1 , G4 , G2 and G8 respectively , whereas P[8] , P[4] and P[6] was the most dispersal P – genotypes .
Keywords : Viral gastroenteritis , Rotavirus , Rapid test device , RT- PCR test .
المقدمة
يُعددد التيدداب المعدددة والامعدداء الحدداد المشددكمة الثانيددة التددي تتسددبب بوفدداة العديددد مددن الاطفددال سددنويا بعددد
إصابات المنطقة التنفسية السفمى في كل من الدول الناميدة والمتطدورة للأطفدال دون سدن 5 سدنوات , وعمدى الدر م
من نجاح خدمات الصحة العامة والرقابة الصحية الحالية في تعقديم الميداه والسديطرة عمدى ميداه الصدري الصدحي
الا انيا ير قادرة عمى الحد من مرض الاسيال , إذ اوضحت العديد مدن الد ا رسدات الحديثدة ان امد ا رض الاسديال
مسددددددددؤولة عدددددددددن 17 % مددددددددددددن وفيددددددددددددات الاطفددددددددددددال دون سددددددددددددن 5 سدددددددددنوات فددددددددددي جميدددددددددع انحددددددددداء العدددددددددالم
( Mathers et al., 2009;Black et al., 2010 ) .
18
توجد ىنالك العديد من المسببات المرضية التي تصيب المعدة والامعاء منيا مسببات بكتيرية , فيروسية
وطفيمية , يمثل فيروس الروتا المسبب المرضي الاكثر شيوعا من بين المسببات الفيروسية في احداث التياب
المعدة والامعاء , ويتسبب ىذا الفيروس بحوالي 39 % من حالات الاسيال المائي الحاد
( Levy et al., 2009 .)
ينتمي فيروس الروتا الى عائمة Reoviridae ويتميز بجزيئتو ير المغمفة المنشورية التركيب, التي
تتكون من ثلاث طبقات من البروتين المحيطة بد 11 قطعة من الحامض النووي الريبي المزدوج الخيط dsRNA
, إذ تتألف المحفظة الخارجية لمفيروس من البروتين الحساس لإنزيم البروتيز Protease وىو البروتين الفيروسي
ال ا ربع VP4 والذي يحدد النوع الو ا رثي P – Genotype والبروتين السكري Glycoprotein وىو البروتين
الفيروسي السابع VP7 والذي يشير الى النوع الو ا رثي G - Genotype ( Pesavento et al., 2006 . )
يشخص فيروس الروتا باستعمال العديد من التقنيات مثل فحص تلازن اللاتكس LAT و المجير
الالكتروني EM , إختبار الإمت ا زز المناعي المُرتبط بالإنزيم ELISA , الانتشار في ىلام الاكريلامايد ومتعدد
الاكريلامايد Acrylamide and polyacrylamide gel diffusion , الز ا رعة النسيجية Tissue culture .
اخي ا ر اعتمدت تقنيات اكثر حداثة تتمثل باستعمال تقنية تفاعل البممرة المتسمسل المعكوس الوقت الحقيقي -
)تفاعلات الكوثرة( Real Time - polymerase chain reaction technique وكذلك تقنية تفاعل البممرة
المتسمسل المألوي )تفاعلات الكوثرة( Conventional polymerase chain reaction technique
)الخفاجي وأبو المعالي , 2013 ) .
أظيرت العديد من الد ا رسات الوبائية التي اجريت في الع ا رق أن فيروس الروتا ىو احد المسببات
الرئيسة لالتياب المعدة والامعاء في الاطفال دون سن الخامسة و التي ت ا روحت النسب فييا من 18.5 % في
تكريت , 24 % في البصرة , 30 % في بغداد و 37 % في اربيل ) Mahmood and Feachem, 1987;Ahmed et al., 2006;Alrifai et al., 2009;Abdulrazzaq et al., 2011 . )
المواد وط ا رئق العمل
العينات
جُمعت 470 عينة ب ا رز من الأطفال ال ا رقدين والم ا رجعين في مستشفى بابدل لمدولادة والأطفدال س مستشدفى
الكفل العام س مستشفى المحا ويل ومستشفى الياشمية المصابين سدريريا بالإسديال ولمفتدرة مدن تشدرين الأول 2011
الدى شدباط 2012 س وُضدعت العيندات فدي أنابيدب اختبدار بلاسدتيكية معقمدة سدعة 5 مممتدر وحفظدت فدي المجمددة
تحت درجة ح ا ررة 60- م لحين إج ا رء الفحوصات المطموبة .
اختبار الشريط السريع One Step Rotavirus Test Device
اُخضدع 470 نموذجدا مدن بد ا رز الاطفدال المصدابين بالاسديال لمفحدص باسدتعمال عددة الكشدف عدن فيدروس الروتدا
المزودة من شركة ) ACON ( الألمانية وقد اجريت طريقة العمل حسب تعميمات الشركة المصنعة .
استخلاص الحمض النووي )الرنا(
استخمص الحامض النووي )الرنا( من عينات ب ا رز الاطفال المحفوظة في الثلاجة باستعمال عدة استخلاص
الحامض النووي الرنا ) IQeasy™ plus Viral DNA RNA Extraction kit ( المزودة من شركة
( INtRON Biotechnology ( الاميركية وقد اجريت طريقة العمل بحسب تعميمات الشركة المصنعة .
18
معرفة النوع الو ا رثي G و] P ]
اُخذت 80 عينة من العينات التدي اعطدت نتيجدة موجبدة باسدتعمال فحدص الشدريط السدريع لمعرفدة الاندواع الو ا رثيدة
G و ] P [ السائدة في المحافظة
1 تحديد النوع الو ا رثي ] - P [ باستعمال بوادئ متخصصة
تتضمن ىذه الخطوة مرحمتين ىما :
المرحمة الول : تتضدمن تحويدل الرندا الفيروسدي إلدى الددنا المدتمم cDNA باسدتعمال عددة تحويدل )الرندا( الدى
)الددنا المدتمم( وبوجدود البدادئ ) ATT TCG GAC CAT TTA TAA CC (الخاصدة ب ) con2 R ( والبدادئ
( TGG CTT CGC TCA TTT ATA GAC A ( الخداص ب ) con3 F ( إذ اجريدت طريقدة العمدل بحسدب
تعميمدات الشدركة المصدنعة . بعددىا حُضدر ىدلام الاكداروز بتركيدز 2 % ورحدل الندات فدي اليدلام بوجدود الواسدم
الددليل )المعمدم( فدي إحدد الحفدر ) 100 bp DNA ladder ( فدي جيداز الترحيدل الكيربدائي وبددأت عمميدة
الترحيل لمدة ساعة وبفولتية مقدارىا 100 فولت و قُرئت النتيجة باستعمال جياز انبعاث الأشدعة فدوق البنفسدجية
UV transiluminator لمتقصي عن وجود قطعة المورث التي تشفر لمد VP4 والتي يبمغ طوليا ) 876 bp .)
المرحمة الثانية: تتضدمن معرفدة الأندواع الو ا رثيدة لمدد VP4 والمتضدمنة P[4] و P[6] و P[8] , P[9] و P[10]
إذ اجريت طريقة العمل بحسب تعميمات الشركة المصنعة .
2 تحديد النوع الو ا رثي - G باستعمال بوادئ متخصصة
تتضمن ىذه الخطوة مرحمتين ىما :
المرحمة الول : تتضمن تحويل الرنا الفيروسي إلى الدنا المتمم Cdna باستعمال عدة تحويل )الرنا( الى )الددنا
المدتمم( بوجدود البدادئ ) GGC TTT AAA AGA GAG AAT TTC CGT CTG G (الخاصدة ب ) Beg 9? F ( والبدادئ ) GGT CAC ATC ATA CAA TTC TAA TCT AAG ( الخداص ب ) End 9? R ( إذ
اجريت طريقة العمل بحسب تعميمات الشركة المصنعة . بعدىا حُضر ىدلام الاكداروز بتركيدز 2 % ورحدل الندات
فدي اليدلام حسدب طريقدة العمدل المدذكورة فدي التعدري عمدى الندوع الدو ا رثي ] P [ لمتقصدي عدن وجدود قطعدة المدورث
التي تشفر لمد VP7 والتي يبمغ طوليا ) 1062 bp . )
المرحمة الثانية: تتضمن معرفدة الأندواع الو ا رثيدة لمدد VP7 والمتضدمنة G1 و G2 و G3 و G4 و G8 و G9
و G12 إذ اجريت طريقة العمل بحسب تعميمات الشركة المصنعة .
18
النتائج
? نتائج اختبار الشريط السريع
أظيرت نتائ فحص 470 انموذج ب ا رز مأخوذة مباشرة من الاطفال المصدابين بالإسديال باسدتعمال فحدص
الشريط السريع ايجابية لد 224 انموذج و بنسبة مقدارىا 47.65 . ) % وكما ىو موضح في الشكل ) 1
) أ ( ) ب (
شكل ) 1(: أ يظهر نتيجة موجبة لفحص الشريط السريع ب يظهر نتيجة سالبة لفحص - - - -
الشريط السريع .
? التعرف عم النوع الو ا رثي G – genotype ) )
بعد التحري تجريبيا عن درجة الح ا ررة المثمى لمتبريد باستعمال نظام Gradiant PCR وكما ىو موضح في
طريقة العمل وباستعمال درجات ح ا ررة من ) 55 – 70 ( , وجد أن الدرجة الح ا ررية المثمى التي تستطيع عندىا
البوادئ بإعادة الارتباط ىي 60 م في المرحمة الأولى من التضخيم وباستعمال البوادئ ) Beg9 و End9 )
التي ثبتتيا منظمة الصحة العالمية والخاصة بالبروتين الفيروسي السابع والذي يشير إلى النوع الو ا رثي G .
أما درجة الح ا ررة المثمى في المرحمة الثانية من تفاعل البممرة المتسمسل والمتضمنة معرفة الأنواع الو ا رثية لمد
VP7 فقد كانت 57 م إذ كُ شف عن ستة أنواع و ا رثية . إذ وجد أن النوع الو ا رثي G1 ىو الأكثر تواجد وبنسبة
30 % يميو G4 والذي ظير بنسبة 7.5 % بينما تواجد النوع الو ا رثي G2 بنسبة 12.5 % , وتمثمت الأنواع
الو ا رثية G8 و G3 و G9 بنسب 6.25 % و 3.75 % و 1.25 % عمى التوالي س و أظيرت نتائ الد ا رسة
بعض النماذج المُرَحّمة التي لم تظير انتماءىا إلى أي نوع و ا رثي من الأنواع المذكورة أعلاه وسجمت عمى أنيا
نماذج ير مشخصة النوع الو ا رثي والتي بمغ عددىا 23 انموذجا من أصل 80 انموذجا والتي مثمت نسبة
28.75 % , وعكست النتائ أيضا وجود خمسة نماذج مرضية تظير خمجا مختمطا بالأنواع الو ا رثية G4 و G9
وكما مبين في الجدول ) 1 . )
18
جدول ) 1 ( : الأنواع الو ا رثية الخاصة بالبروتين الفيروسي السابع والمعروفة ب G باستعمال فحص تفاعل
البممرة المتسمسل التقميدي Conventional – PCR .
النسبة المئوية العدد
اسم البادئ G النوع
% 30 24 aBT1 G1
% 12.5 10
aCT2 G2 % 3.75 3 G3-Aust G3
% 17. 5 14
aDT4 G4 % 6.25 5 aAT8 G8
% 1.25 1
G9 or Mg9 G9 28.75 % 23 غير مشخصة
? التعرف عم النوع الو ا رثي P – genotype ) )
وعند التحري عن الدرجة الح ا ررية المثمى لمتبريد باستعمال نظام Gradiant PCR وكما موضح في طريقة
العمل وباستعمال درجات ح ا ررة من 45 الى 60 , وجد أن الدرجة الح ا ررية المثمى التي تستطيع عندىا
البوادئ بإعادة الارتباط ىي 50 م في المرحمة الأولى من التضخيم وباستعمال البوادئ con2 و con3
التي ثبتتيا منظمة الصحة العالمية والخاصة بالبروتين الفيروسي ال ا ربع VP4 والذي يشير إلى النوع الو ا رثي
[P] .
أما درجة الح ا ررة المثمى في المرحمة الثانية والمتضمنة معرفة الأنواع الو ا رثية المشفرة لمدبروتين الفيروسي
ال ا ربع VP4 فقد كانت 55 م , وقد كُ شف عن خمسة أنواع و ا رثية . ووجد النوع الو ا رثي P[8] بأكبر نسبة
36.25 % إذ شخص في 29 انموذجا من أصل 80 انموذجا , يميو الن وع P[4] وقد وجد في 19 انموذجا
من أصل 80 وشكل نسبة 23.75 % . أما النوع P[6] فكانت نسبتو 12.50 % إذ وجد في 10 نماذج
من أصل 80 انموذجا , بينما تمثل النوعان P[9] و P[10] بأقل النسب إذ بمغا 2.50 % و 1.25 %
عمى التوالي . في حين ظير كلا من P[4] و P[8] بصورة مشتركة في نموذجين , وقد أظير 19 انموذجا
من أصل 80 انموذجا نتيجة سالبة في الترحيمة الثانية الخاصة بمعرفة الأنواع الو ا رثية ] [P وشكمت نسبة
23.75 % . وكما مبين في الجدول ) 2 . )
جدول ) 2( : الأنواع الو ا رثية الخاصة بالبروتين الفيروسي ال ا ربع والمعروفة ب P] [ باستعمال فحص تفاعل
البممرة المتسمسل التقميدي ) conventional – PCR . )
النسبة المئوية العدد
اسم البادئ P النوع
% 23.75 19 2T-1 P[4]
% 12.50 10
3T-1 P[6] % 36.25 29 1T-1 P[8]
% 2.50 2
4T-1 P[9] % 1.25 1 5T-1 P[10]
% 23.75 19
غير مشخصة
18
لوحظ حدوث خم مختمط بأكثر من نوع و ا رثي فقد وجد كلا من G1 P[8] / G4 بصورة مشتركة في 19
انموذج , بينما وجد النوعان G1P[4] / G2 في 11 أنموذجا . و وجدنا أن الضرب الو ا رثي G1P[8] ىو
أكثر الأنواع انتشا ا ر إذ شخص في 30 انموذجا س تُبعو الضرب الو ا رثي G1[P4] إذ وجد في 11 انموذجا ,
أما الضرب G2P[4] فقد وجد في 7 نماذج , ووجد الضرب G4P[8] في 3 نماذج س اما الضربان
G9P[8] و G3P[10] فقد وجدا في انموذجين لكل ضرب س واخي ا ر تواجد الضربان G8P[6] و G1P[9]
في انموذج واحد لكل ضرب .
المناقشة
يُعدد الاسديال مدن المشداكل الصدحية الكبيدرة التدي تصديب الأطفدال بعمدر أقدل مدن 5 سدنوات , يسدبب مدا
يقدارب 1.8 مميدون حالدة وفداة سدنويا , وىنداك العديدد مدن المسدببات المرضدية المختمفدة المُسدببة للإسديال المدائي
الحددددددددددددددددددددادس وتُعددددددددددددددددددددد الفيروسددددددددددددددددددددات ىددددددددددددددددددددي المسددددددددددددددددددددؤولة عددددددددددددددددددددن أكثددددددددددددددددددددر مددددددددددددددددددددن نصددددددددددددددددددددف الحددددددددددددددددددددالات
( Alain and Denis , 2007 ; Boschi- pinto et al., 2007 ( . يُشدكل فيدروس الروتدا نسدبة أكثدر مدن
50 % مدن حدالات الخمد الفيروسدية ويصديب كدلا مدن الانسدان والحيدوان س وان المجموعدة A مدن فيدروس الروتدا
ىي المسؤولة عن أكثر من 90 % من حالات التياب المعدة والأمعاء في الانسان, ويتسدبب فيدروس الروتدا بوفداة
اكثر من 527000 طفل سنويا في الدول النامية ) Wang et al., 2010; WHO, 2011 . )
أجريت العديد من الد ا رسات لتحديد الأنواع الو ا رثية المختمفة لفيروس الروتا ففي الد ا رسة الحالية استعممت
تقنية تفاعل البممرة المتسمسل المعكوس التقميدي لمكشف عن الفيروس ويعود سبب اختيار ىذه التقنية بسبب
تضارب نسب الإصابة بيذا الفيروس بين محافظة وأخر وبين سنة وأخر , إذ سيقودنا ىذا الاختبار لمعرفة
الأنواع الو ا رثية الاكثر شيوعا في محافظة بابل لغرض معرفة مد ملاءمة المقاح المتداول في الم ا ركز الصحية
لتمقيح الاطفال ضمن برنام أعدتو و ا زرة الصحة .
ووفقا لمتقارير المسجمة في جميع انحاء العالم وجد أن الانواع الو ا رثية الرئيسة السائدة في جميع انحاء العالم
تقريبا ىي G1 و G2 و G3 و G4 و G9 والتي توجد بشكل مشترك مع الانواع الو ا رثية P[4] و P[6] و P[8]
( Santosham et al., 2007 . )
تطابقت نتائ الد ا رسة الحالية مع النتائ التي توصل الييا الباحث Ahmed وجماعتو ) 2006 ( في
كردستان الع ا رق التي بينت ان الأنواع الو ا رثية G1 و G4 و G2 ىي السائدة في كردستان الع ا رق , اما P[8] و
P[6] و P[4] فيي الأنواع الو ا رثية الأكثر انتشا ا ر في تمك المنطقة , وعمى الر م من وجود النوع الو ا رثي G12
في كردستان الع ا رق فانو لم يُثبت في الد ا رسة الحالية.
وقد تطابقت النتائ مع النتائ التي توصل الييا الباحثون في الدول المجاورة منيا اي ا رن , إذ وجد الباحثون
ان الانواع الو ا رثية G1 و G4 و G8 ىي الاكثر انتشا ا ر , بينما كان الن وع الو ا رثي P[8] ىو الاكثر تواجد ويميو
النوع P[4] ( Modaress et al., 2011 . )
وقد كُ شف عن وجود النوع الو ا رثي G9 في ىذه الد ا رسة وكانت النتائ ىذه مؤيدة لما كُ شف عنو في
كل من اي ا رن و اليابان وتايمند ) Thtamboonlers et al., 2008 . )
18
بينما تضاربت النتائ التي توصمنا الييا مع نتائ الد ا رسة التي اجريت في تركيا والتي أوضحت ان
الضرب المصمي G4P[8] ىو الأكثر تواجدا في تمك المنطقة يميو الضرب المصمي G1P[8] وتمثل ىذه
السلالات أكثر من ثمثي عدد السلالات التي كُ شف عنيا في د ا رستيم ) Cataloluk et al., 2005 . )
بين Al-Khafaji و Al-Jibury (2013) ان حساسية فحص الشريط السريع كانت مشابية
لحساسية فحص تلازن اللاتكس وفحص الانزيم المناعي المرتبط بالانزيم ) الالي ا ز( اما خصوصية فحص
الشريط السريع فقد كانت اقل من الفحصين الانفين الذكر.
لم يُشخص فيروس الروتا باستعمال تقنية تفاعل البممرة المتسمسل المعكوس التقميدي في بعض النماذج
ويُعز ذلك الى العديد من الاسباب منيا حدوث فشل في عمل الد ) PCR ( , أو كانت ىذه النماذج ذات نتائ
موجبة كاذبة False Positive باستخدام فحص الشريط , وجود سلالات جديدة أو عدم استعمال كافة البوادئ
المثبتة لد منظمة الصحة العالمية ) WHO, 2009 . )
المصادر العربية
الخفاجي زهرة محمود وأبو المعالي حسن محمود ) 2013 ( تفاعلات الكوثرة وتصميم البوادئ PCRing & Primer Design , الع ا رق .
المصادر الجنبية
Abdulrazzaq, A.; Aljeboory, S. K.; Abdulkareem, S. and Klena, J. (2011).Two different diagnostic methods for detection of rotavirus in Iraqi young Children. Al-Anbar J. Vet. Sci. , 4 (1) : 50 - 55 .
Al-Khafaji Y.A and Al-Jibury H.J. (2013). Detection of rotavirus in diarrhea stool samples of children with acute gastroenteritis in Babylon governorate, Iraq. Inter. Research j. Microb., 4(3): 84-88.
Ahmed, H.M.; Coulter, J.B.S.; Nakagomi, O.; Hart, C.A.; Zaki, J.M.;. Al-Rabaty, A.A.; Dove, W. and Cunliffe, N.A. (2006). Molecular Characterization of Rotavirus Gastroenteritis Strains, Iraqi Kurdistan. Emerg. Infect. Dis. , 12(5) : 824 -826.
Alain, S. and Denis, F. (2007) . Epidemiology of infectious acute diarrhoea in France and Europe. Arch. Pediatr. , 14 (3): 132-144.
Alrifai, S.B.;Alsaadi, A.;Mahmood, Y.A.;Ali, A.A. and Al-Kaisi, L.A. (2009).Prevalence and etiology of nosocomial diarrhea in children < 5 years in Tikrit teaching hospital. East. Medite. Healt. J. , 15(5) : 1111-1118.
Black, R.E.;Cousens, S.;Johnson, H.L.;Lawn, J.E.;Rudan, I.;Bassani, D.G.;Jha, P.;Campbell, H.;Walker, C.F.;Cibulskis, R.;Eisele, T.;Liu, L. and Mathers, C. (2010). Global, regional, and national causes of child mortality in 2008: a systematic analysis. Lancet. , 375(9730) :1969 - 1987.
Boschi-Pinto, C.;Velebit, L. and Shibuya, K. (2007) . Estimating child mortality due to diarrhea in developing countries : A meta-analysis review. Bull. World Healt. Organ. , 51 : 505 – 516 .
Cataloluk,O.;Iturriza,M. andGray, J.(2005).Molecular characterization of rotaviruses circulating in the population in Turkey. Epidemiol. Infect. , 133(4): 673 - 678.
Levy, K.;Hubbard, A.E. and Eisenberg, J.N. (2009) .Seasonality of rotavirus disease in the tropics: a systematic review and meta-analysis. Int. J. Epidemiol. , 38 (6) : 1487 - 1496.
11
Mahmood, D.A. and Feachem, R.G. (1987).Clinical and epidemiological characteristics of rotavirus- and EPEC-associated hospitalized infantile diarrhoea in Basrah, Iraq. J. Trop. Pediatr. , 33 (6) : 319 - 325 .
Mathers, C.D.;Boerma, T. and Fat, D.M. (2009).Global and regional causes of death . Br. Med. Bull. , 92 (1) : 7 - 32.
Modaress, S;Rahbarimanesh, A.A.;Edalat,R.;Sohrabi, A.;Modarres, S.;Gomari, H.;Motamedirad, M. and Sayari, A.A. (2011). Human Rotavirus Genotypes Detection among Hospitalized Children, A study in Tehran, Iran . Arch. of Iran. Med. , 14(1) : 39 - 45 .
Pesavento, J.B.;Crawford, S.E.;Estes, M.K. and Prasad, B.V. (2006).Rotavirus proteins: structure and assembly. Curr. Top Microbiol. Immunol. , 309: 189 - 219 .
Santosham, M.;Nelson, E.A. and Bresee, J.S. (2007) .Implementing rotavirus vaccination in Asia. Vaccin. , 25(44) : 7711 - 7716.
Thtamboonlers, A.;Bhattarakosol, P.;Chongsrisawat, V.; Sungkapalee, T.;Wutthirattanakowit, N. and Poovorawan, Y. (2008).Molecular characterization of group of A human rotaviruses in Bangkok and Buriram , Thailand during 2004 - 2006 reveals the predominance of G1P[8], G9P[8] and rare G3P[19] strain. Virus Genes. , 36(2) : 289 - 298.
Wang, F.T.;Mast, T.C.;Glass, R.J.;Loughlin, J. and Seeger, J.D. (2010) .Effectiveness of the pentavalent Rotavirus vaccine in preventing gastroenteritis in the United States . Pediat. , 125(2) : 208 - 213 .
WHO,(World Health Organization) (2009).Department of Immunization ,Vaccines and Biological. Manual of rotavirus detection and characterization methods. CH-1211 Geneva 27, Switzerland. This publication is available on the Internet at: www.who.int/vaccinesdocuments .
WHO,(World Health Organization) (2011) .Estimated Rotavirus deaths for children under 5 years of age: 2004, 527 000. Immunization Surveillance, Assessment and Monitoring, World Health Organization, Geneva, Switzerland.